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黄芪提取物对体外高糖培养大鼠视膜微血管内皮细胞影响的实验研究         
黄芪提取物对体外高糖培养大鼠视膜微血管内皮细胞影响的实验研究
作者:吴春晓  … 文章来源:成都中医药大学眼科实验室 四川 成都 610075 点击数:5553 更新时间:2007/6/27 12:14:42
目的:(1)建立大鼠视网膜微血管内皮细胞体外常规及高糖培养模型。(2)观察高糖对内皮细胞的影响。(3)观察黄芪提取物H20对体外高糖培养大鼠视网膜微血管内皮细胞的影响。 方法:(1)建立大鼠视网膜微血管内皮细胞(RRCEC)体外常规培养模型。(2)将常规培养的RRCEC分组换液为含不同葡萄糖浓度(5.5mmol/L、11mmol/L、22 mmol/L、33mmol/L、44mmol/L、55mmol/L)的DMEM培养液,分别培养1d、2d、4d、6d,通过形态学观察、MTT法,研究高糖对RRCEC的影响。(3)高糖(33mmol/L)培养2d的RRCEC中加入0.4mg/ml H20,作为黄芪组;常规(5.5mmol/L)培养2d的RRCEC作为正常组;高糖(33mmol/L)培养2d的RRCEC作为模型组,分别培养48h,MTT法测定每组光密度值,计算抑制率。(4)各组培养48h后收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率。(5)各组培养48h后收集细胞上清液,检测上清液中ICAM-1 、NO含量及SOD活力。 结果:(1)体外培养的RRCEC的特点:细胞呈多边形,单层生长,接触抑制,典型的铺路石样排列。第Ⅷ因子相关抗体染色阳性,呈棕黄色,证实为内皮细胞。(2)高糖44 mmol/L、55 mmol/L培养1d,高糖33mmol/L 、44 mmol/L、55 mmol/L培养2d,高糖22 mmol/L、33 mmol/L、44 mmol/L、55 mmol/L培养4d、6d RRCEC增殖均出现抑制,并与葡萄糖浓度升高和作用时间延长成正相关,以55 mmol/L培养6d最高;(3)黄芪组细胞增殖抑制率低于模型组(P<0.05);(4)黄芪组细胞凋亡率明显低于模型组(P<0.01);(5)黄芪组ICAM-1含量明显低于模型组(P<0.01),黄芪组NO含量高于模型组(P<0.05),黄芪组SOD活力高于模型组(P<0.01)。 结论:(1)高糖对RRCEC增殖具有明显抑制作用,并与葡萄糖浓度及作用时间成正相关。(2)高糖能促进RRCEC凋亡,增加细胞上清液中ICAM-1的含量,降低细胞上清液中SOD活性和NO含量。(3)H20对高糖所致RRCEC的损伤有保护作用,这种保护作用可能是通过减少细胞脂质过氧化物生成,提高细胞清除氧自由基的能力、促进细胞DNA和蛋白质合成来实现的。
会议投稿录入:liqiang20020701    责任编辑:毛进 
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